Posebno se zahvaljujem svom mentoru profesoru dr Aleksi Obradoviću, koji je definisao plan i program istraživanja ove doktorske disertacije. Zahvaljujem se na velikom strpljenju, predusretljivosti, bezrezervnoj podršci i prenetom znanju...
morePosebno se zahvaljujem svom mentoru profesoru dr Aleksi Obradoviću, koji je definisao plan i program istraživanja ove doktorske disertacije. Zahvaljujem se na velikom strpljenju, predusretljivosti, bezrezervnoj podršci i prenetom znanju tokom zajedničkog rada. Veliko hvala profesorki dr Mirjani Milošević na savetima, podršci i svemu što me je naučila. Zahvalnost dugujem profesorki dr Jelici Balaž na prenetom znanju i pravovremenim savetima tokom višegodišnje saradnje. dr Jelici Gvozdanović-Varga hvala na konstruktivnim savetima i sugestijama. Veliku zahvalnost dugujem dr Zorici Nikolić na prijateljskoj podršci i dragocenim sugestijama koje su značajno doprinele kvalitetu disertacije. Zahvaljujem se dr Katarini Gašić, dr Milanu Ivanoviću i dipl. ing Milanu Ševiću na podršci i pomoći u eksperimentalnom radu. Želim da izrazim svoju zahvalnost koleginici mr Dragani Milošević i dipl. ing Aranki Jevtić, kao i svim kolegama iz Laboratorije za ispitivanje semena, Instituta za ratarstvo i povrtarstvo. Zahvaljujem se svom sinu Stefanu, porodici i prijateljima na razumevanju i podršci. Doktorska disertacija realizovana je u okviru projekta Ministarstva prosvete, nauke i tehnološkog razvoja, Republike Srbije, TR31030, pod nazivom: «Stvaranje sorata i hibrida povrća za gajenje na otvorenom polju i zaštićenom prostoru». DIVERZITET POPULACIJE Xanthomonas spp. PATOGENA PAPRIKE U SRBIJI Rezime. Tokom 2008, 2009 i 2010. godine prikupljeni su uzorci obolelog lišća paprike sa simptomima bakteriozne pegavosti iz različitih lokaliteta Republike Srbije. Izolacijom iz zaraženih listova dobijeno je 116 sojeva bakterija. Proučavanja patogenih, biohemijsko-fizioloških odlika ukazuju da proučavani sojevi pripadaju vrsti Xanthomonas euvesicatoria. Primenom dva serološka testa (DAS-ELISA i test aglutinacije) potvrđena je antigena uniformnost proučavanih sojeva, kao i serološka sličnost sa bakterijom X. c. pv. vesicatoria. Diferencijacija Xanthomonas spp. prouzrokovača bakteriozne pegavosti paprike izvršena je primenom dve molekularne metode. Prvi metod zasnivao se na restrikcionoj analizi-RFLP (Restriction Fragment Lenght Polymorphism) fragmenta hrp gena (HrpB regiona) nakon digestije (sečenja) dobijenih proizvoda restrikcionim enzimima (CfoI, TaqI i HaeIII). Poređenjem restrikcionih profila proučavanih sojeva sa kontrolnim sojevima, potvrđena je sličnost sa vrstom X. euvesicatoria. Drugi molekularni metod je lančana reakcija polimeraze primenom specifičnih prajmera koji amplifikuju proizvode različite veličine specifične za: X. euvesicatoria-173 bp; X. vesicatoria-138 bp; X. perforans-197 bp i X. gardneri-154 bp. Kod svih proučavanih sojeva, uključujući i kontrolni soj X. euvesicatoria KFB (189) detektovani su fragmenti DNK veličine 173 bp, koji odgovaraju vrsti X. euvesicatoria. Utvrđeno je da je prag detekcije ove metode 0,4 x 10 3 CFU/ml. Proučeno je dejstvo bakar-sulfata (CuSO 4), antibiotika streptomicina i kasugamicina, pri različitim koncentracijama, na razvoj bakterijskih ćelija u in vitro uslovima. U podlogu su dodati filterom sterilisani rastvori bakar-sulfata do konačne koncentracije od 100 i 200 ppm tj. aktivne komponente navedenih antibiotika do konačne koncentracije od 50, 100 i 200 ppm. Sojevi rezistentni na streptomicin nisu detektovani ovim istraživanjima. Rezistentnost prema 50 ppm kasugamicina utvrđena je kod 6 sojeva, a 19 sojeva je bilo rezistentno na 200 ppm bakar-sulfata. Dobijeni rezultati ukazuju na opasnost od razvoja rezistentnosti bakterija prema ovim jedinjenjima. Zastupljenost pojedinih fizioloških rasa među proučavanim sojevima određena je na osnovu reakcije biljaka paprike sorte Early Calwonder (ECW), njenih izogenih linija ECW-10 (Bs1), ECW-20 (Bs2), ECW-30 (Bs3) i biljaka paprike Capsicum pubescens PI235047 (Bs4). Ustanovljeno je da proučavani sojevi predstavljaju heterogenu populaciju u kojoj su zastupljene četiri fiziološke rase bakterije X. euvesicatoria (P1, P3, P7, P8). Proučena je osetljivost 11 odabranih genotipova paprike prema rasi P8 bakterije X. euvesicatoria: HS-2, Amfora, Plamena, Anita, Novosađanka, Palanačka babura, Palanačko čudo, Slonovo uvo, Brillant F1, Bihar F1 i Boni. Samo je hibrid Bihar F1 ispoljio određeni stepen otpornosti prema bakteriji, dok su svi ostali proučavani genotipovi pokazali visok stepen osetljivosti. U ovom radu izolovani su bakteriofagi specifični prema vrsti Xanthomonas euvesicatoria, prouzrokovaču bakteriozne pegavosti paprike. Proučavanjem kruga domaćina, utvrđeno je da su izolati usko specifični prema vrsti X. euvesicatoria i da ne ispoljavaju aktivnost prema ostalim vrstama Xanthomonas spp. patogena paprike i paradajza.