MIKROBIOLOGI - Pengertian Inokulasi, Jenis-jenis, dan medianya

2018

Inokulasi merupakan pemindahan mikroba dari lingkungan aslinya ke media yang baru dengan menggunakan tingkat ketelitian yang sangat akurat agar tidak terjadi kontaminasi dari mikroba lain atau gangguan dari serangga. Media merupakan bahan yang digunakan untuk menumbuhkan mikroorganisme karena mengandung banyak vitamin, nutrisi, energi atau unsur hara lain yang dimana mempunyai peran yang sangat penting bagi kelangsungan hidup suatu mikroorganisme. Praktikum ini dilakukan dengan tujuan untuk mengetahui teknik dan fungsi media pada inokulasi mikroba, serta untuk mengetahui pengaruh dari pengenceran bertingkat terhadap inokulasi media. Pembuatan larutan fisiologis 0,85% dilakukan untuk mengencerkan suspensi dari bahan yoghurt hingga mencapai pengenceran 10-5 yang kemudian diinokulasi dengan menggunakan metode spread plate. Metode spread plate dilakukan dengan cara media NA dituang ½ volume cawan petri ke dalam cawan petri kemudian ditunggu hingga memadat. Bahan yang berasal dari yoghurt kemudian dituang ke atas permukaan media dan ditebar dengan menggunakan hockey stick. Berdasarkan hasil percobaan ini, terdapat mikroba yang tumbuh pada cawan petri dengan bentuk bulat tidak beraturan, berwarna kuning, serta penyebarannya yang tidak merata. Kontaminasi juga terjadi pada praktikum ini, yaitu tumbuhnya hifa pada hari kedua.

Media pertumbuhan mikroorganisme adalah suatu bahan yang terdiri dari campuran zat-zat makanan (nutrisi) yang diperlukan mikroorganisme untuk pertumbuhannya. Mikroorganisme memanfaatkan nutrisi media berupa molekulmolekul kecil yang dirakit untuk menyusun komponen sel. Dengan media pertumbuhan dapat dilakukan isolat mikroorganisme menjadi kultur murni dan juga memanipulasi komposisi media pertumbuhannya (Sosilowati dan Listyawati 2001). Pembiakan mikroba dalam laboratorium memerlukan medium yang berisi zat hara serta lingkungan pertumbuhan yang sesuai dengan mikroorganisme. Zat hara digunakan oleh mikroorganisme untuk pertumbuhan, sintesis sel, keperluan energi dalam metabolisme, dan pergerakan. Lazimnya, medium biakan berisi air, sumber energi, zat hara sebagai sumber karbon, nitrogen, sulfur, fosfat, oksigen, hidrogen serta unsur-unsur sekelumit (trace element). Dalam bahan dasar medium dapat pula ditambahakan faktor pertumbuhan berupa asam amino, vitamin atau nukleotida (Waluyo 2011). Media biakan ada yang berbentuk padat, cair dan semi padat. Media padat adalah media biakan yang dipadatkan dengan agar, ada yang bersifat reversible (dapat dibalik) seperti agar nutrien dan ada yang bersifat ireversible (tidak dapat dibalik) seperti serum darah terkoagulasi. Dalam kedokteran, media padat yang bersifat irreversible paling sering digunakan. Sedang agar nutrient banyak digunakan dalam media lain. Bentuk media lain berupa cair adalah campuran komponen-komponen zat kimia tertentu dengan air suling, sedang media yang secara fisik merupakan intermediate antara media cair dan padat, seperti agar lunak (Atlas 2004). Berdasarkan komposisinya, media terdiri dari media sintesis, semi sintesis, dan non sintesis. Media sintesis yaitu media yang komposisi zat kimianya diketahui secara pasti. Media semi sintesis yaitu media yang sebagian dari komposisi kimianya diketahui, sedangkan media non sintesis yaitu media yang komposisi zat kimia dalam medianya tidak diketahui. Sementara berdasarkan fungsinya media terdiri dari media umum, media selektif, media differensial, media uji, dan media diperkaya. Media umum yaitu media yang terdiri dari pepton dan ekstrak khamir untuk pertumbuhan banyak jenis mikroba. Contohnya adalah media NA (Nutrient Agar). Media selektif adalah media yang ditambah zat tertentu sehingga bersifat selektif yang hanya merangsang pertumbuhan satu jenis mikroba dan jenis lainnya mati. Contohnya media TCBS (Thiosulfate Cytrat Bile Salt). Media diffferensial adalah media yang yang mengandung suatu komponen yang menyebabkan pertumbuhan mikroba tertentu dengan adanya perubahan tertentu yang dapat membedakan mikroba tersebut dari mikroba yang lainnya. Comtohnya media EMBA (Eosin Metilen Blue Agar). Media uji adalah media dengan komposisi tertentu untuk mengetahui atau menguji adanya zat tertentu. Sementara media diperkaya adalah media yang berisi komponen komplek, seperti darah, serum dan lain-lain.

Pertumbuhan mikroorganisme sangat bergantung pada kandungan nutrisi yang terdapat dalam lingkungan sekitarnya. Dalam melakukan kultivasi bakteri pada suatu media, diperlukan persyaratan yaitu semua unsur hara yang dibutuhkan mikroorganisme harus terpenuhi pada media agar mikroorganisme yang tumbuh dapat berkembang dengan optimal pada media. Kultivasi bakteri adalah metode untuk melipatgandakan jumlah mikroba dengan membiarkan mereka berkembang biak dalam media biakan yang telah disiapkan dalam kondisi yang terkendali. Menurut Suriawati , media harus memiliki tekanan osmosis, tegangan permukaan, dan pH yang sesuai dengan kebutuhan dari mikroba, zat penghambat pertumbuhan organisme harus dihilangkan pada media, dimana media harus steril sehingga kultur mikroba yang tumbuh tidak terkontaminasi. Sterilisasi digunakan untuk menghilangkan gangguan yang dapat disebarkan oleh mikroorganisme atau kontaminasi dan meminamilisir penurunan kualitas inokulasi (Dewi et al., 2017). Sterilisasi terhadap alat dan bahan sebelum pelaksanaan kegiatan praktikum mikrobiologi membantu hasil atau identifikasi yang akurat terhadap pemeriksaan mikrobiologi. Dengan melakukan praktikum ini, diharapkan kultivasi bakteri dan pembuatan media dapat membantu memasok bakteri untuk bidang Rekayasa Kehutanan. II. TUJUAN 1. Menentukan perbedaan komposisi media pertumbuhan untuk bakteri dan jamur 2. Menentukan fungsi dan prinsip dasar dari sterilisasi panas menggunakan autoklaf 3. Menentukan fungsi dan prinsip dasar dari sterilisasi fisik menggunakan teknik filtrasi 4. Menentukan fungsi dan prinsip dasar dari sterilisasi kimia menggunakan alkohol 70%, antibiotik, dan antifungi 5. Menentukan perbedaan dan fungsi dari teknik-teknik isolasi dan purifikasi mikroba 6. Menentukan perbedaan dan fungsi dari teknik-teknik kultivasi mikroba MODUL III -MUHAMMAD YUNUS SULTHAN AZHAR IDRUS -11518053 III. HIPOTESIS 1. Perbedaan komposisi media pertumbuhan untuk bakteri dan jamur adalah pada media pertumbuhan bakteri komposisinya dari ekstrak daging dan ekstrak ragi, sedangkan komposisi media pertumbuhan jamur utamanya berupa ekstrak kentang. 2. Prinsip sterilisasi panas dengan autoklaf adalah menggunakan panas dan tekanan uap air yang dihasilkan untuk membunuh bakteri setelah dipanaskan. 3. Prinsip sterilisasi fisik dengan teknik filtrasi adalah menfiltrasi atau menyaring cairan dengan suatu saringan dengan ukuran pori-pori yang sangat kecil sehingga mikroba tertahan pada saringan tersebut. 4. Sterilisasi kimia menggunakan alkohol 70%, antibiotik, dan antifungi berfungsi untuk membersihkan atau mensterilisasi secara kimia. Alkohol 70% mampu mematikan mikroorganisme secara umum, antibiotik mampu mematikan bakteri, dan antifungi mampu mematikan jamur. 5. Teknik isolasi dan purifikasi berfungsi untuk memisahkan atau memindahkan mikroba. Pada teknik isolasi bakteri dipisahkan/dipindahkan dari lingkungan aslinya, sedangkan pada purifikasi bakteri dipisahkan/ dipindahkan dari koloninya. 6. Fungsi teknik kultivasi mikroba metode tusuk, gesek, dan tanam adalah untuk budidaya mikroba. Perbedaan ketiga metode tersebut adalah pada cara meletakkan/memasukkan mikroba pada media tumbuh. IV. CARA KERJA 1. Persiapan Alat dan Bahan dengan Teknik Aseptik Praktikum pewarnaan sel bakteri diawali dengan menyiapkan alat dan bahan yang akan digunakan. Alat dan bahan yang akan digunakan adalah alkohol 70%, alkohol 96%, antibiotik streptomisin, antifungi nystatin, autoklaf, batang l, bunsen, cawan petri steril, falcon steril, filter, glukosa, jarum oose, kapas lemak, kawat oose, kawat oose bulat, kawat oose lurus, kultur campuran, kultur jamur Penicillium sp., kultur jamur Rhizopus oligosporus, kultur bakteri Serratia marcescens dan Staphylococcus aureus, medium NA dalam cawan petri, medium NA padat, medium NB dalam MODUL III -MUHAMMAD YUNUS SULTHAN AZHAR IDRUS -11518053 tabung reaksi, medium PDA dalam cawan petri, mikropipet, NA cair, plat NA miring dalam tabung reaksi, plat NA tegak dalam tabung reaksi, plat PDA dalam cawan petri, suntik steril, dan tabung reaksi. Meja, tangan, serta peralatan yang akan digunakan harus dibersihkan terlebih dahulu menggunakan alkohol 70% untuk meminimalisir terjadinya kontaminasi.